外泌体提取试剂盒（磁珠法）
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外泌体是一种具有磷脂双分子层的细胞外囊泡（EVs），直径在30-150纳米之间，由细胞响应各种环境刺激或自我激活而分泌，广泛存在于血液、尿液、脑脊液等体液中。自20世纪80年代被发现以来，外泌体因携带蛋白质、核酸、脂质等生物活性分子，成为细胞间通讯的“信使”，在药物递送、临床诊断和疾病治疗如抗肿瘤、组织修复（如妊娠纹修复）、神经退行性疾病、抗纤维化、抗衰老、脊髓损伤修复、毛发再生等领域具有广泛应用前景。目前，在国际临床试验注册网站www.clinicaltrial.gov上登记的Extracellular Vesicles (EVs)相关临床研究已达150余项。
然而，宿主细胞来源的外泌体原料中含有大量细胞碎片、脂蛋白及超聚体等杂质，为外泌体的高效分离带来了挑战。目前外泌体分离主要包括超速离心、PEG沉淀法、尺寸排阻色谱（SEC）、免疫亲和捕获法、以及磁珠法。磁珠法的基本原理是利用磁性颗粒偶联外泌体膜特异性配体，对外泌体进行快速分离。通常该方法得到的外泌体回收率高（> 50%）、纯度高（杂质去除率 > 95%）。
传统的磁珠亲和捕获法先在超速离心的基础上富集EVs，接着利用外泌体特异性抗体（如CD9、CD63、CD81）修饰的磁珠与富集的EVs共同孵育，利用免疫的抗原与抗体特异性结合的方法富集外泌体（Exosome Isolation Kit Pan-human）。另一种商用的亲和捕获法是基于Tim4蛋白-磷脂酰丝氨酸（PS）亲和法（MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS，TransExo® PS Exosome Isolation Kit)。Tim-4蛋白是一种单链I型膜蛋白，能以钙离子依赖的方式与富含磷脂酰丝氨酸（PS）的外泌体结合，再经过含有EDTA的洗脱缓冲溶液进行分离，提取高纯度的完整外泌体。传统的磁珠法需要偶联特定的蛋白，成本比较高。东纳生物推出的高性价比外泌体提取试剂盒（磁珠法）基于自主研发的外泌体提取磁珠，能够特异性捕获外泌体且不吸附杂质，实现高纯度、高回收率的外泌体分离，操作简便，尤其适用于血浆、血清等复杂样本或微量珍贵样本中的外泌体分离。
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原理概述
利用自主研发的外泌体提取磁珠通过和EVs双层磷脂的磷酸基形成双齿结构捕获EVs，以及磁性分离技术，达到高纯度和高回收率的分离效果。
1. 血液样本收集要求
具体操作步骤：
（1）空腹静脉采血，静脉采血后收集至EDTA抗凝管（含有K2EDTA抗凝剂）中。收集完毕后，将抗凝管轻轻倒转8-10次。
（2）采集后半小时内，将样品离心10 min，离心条件：室温，1000 g。
（3）离心完毕后，轻轻吸取分界面0.5 cm以上的浅黄色血浆至新无酶离心管中，留下约0.5 cm的血浆在分界面缓冲层之上，不要扰动分界面避免污染。
（4）将新无酶离心管中的样品离心10 min，离心条件：室温，2500 g。
（5）第二次离心后，弃掉底部20 μL的血浆，将血浆上方部分重新转移至新的离心管中。
（6）将新离心管移入-80℃冰箱内保存。
2. 外泌体的提取
首先通过低速离心去除血浆样本中的细胞及细胞碎片，然后使用0.22 μm滤膜过滤以去除大的细胞外囊泡。取20 μL过滤后的血浆样本与0.28 mg磁珠在180 μL结合液中孵育，以捕获血浆样本中的外泌体。结合条件：反应体系中磁珠浓度为1.4 mg/mL, 孵育时间7 min，温度37℃，期间需振荡以确保充分结合。
3.外泌体的洗脱
洗脱过程：将磁珠与外泌体复合物置于37℃振荡器中，加入到400 μL洗脱液中孵育10分钟，以确保外泌体从磁珠上充分释放。随后，快速进行磁分离，通过超滤系统（30 kDa）将上清液中的洗脱液溶液替换为保存液，并用保存液洗涤3次。通过纳米颗粒跟踪分析技术，来验证洗脱效率。
优势
分离的外泌体纯度高且完整性好，适合分离微量或珍贵样品中外泌体；分离操作简便，仅需常规磁力架，无需特殊设备，高通量，能同时处理多个样本，兼容自动化操作，性价比高。