His标签纯化原理:组氨酸标签也称His-tag,由于其具有分子量小(0.84 KD)、免疫原性低、纯化条件温和等特点,成为最简单、应用最广泛的纯化标签,具有六个或更多连续的组氨酸残基,其可插入目的蛋白的C末端或N末端,利于纯化。His标签可以和Ni2+、Co2+等过渡金属离子形成配位键从而与金属离子选择性的结合,使含有His标签的蛋白质特异性地结合到固定化的金属离子上,而其他蛋白质则没有这种结合能力。通过改变溶液的pH值或使用竞争性配体,可以有效地洗脱结合的蛋白质。目前Histag蛋白纯化磁珠主要包括镍离子(Ni2+)和钴离子(Co2+)两种金属离子螯合磁珠。它们在目标蛋白结合量及所得目标蛋白纯度上有所差异,镍离子螯合磁珠能满足大多数用户对蛋白载量和纯度的要求;对纯度要求更高的用户可以使用钴离子螯合磁珠。 His-Tag蛋白纯化磁珠分选His-tag蛋白的原理 产品特点:东纳生物提供的Histag蛋白纯化磁珠是由Nα,Nα-双(羧甲基)-赖氨酸水合物(ANTA)共价偶联至1 mm羧基磁珠,再通过ANTA的4个结合位点螯合二价镍离子(Ni2+)制备而成,具有超顺磁性、磁响应速度快、亲水性好、单分散性好、蛋白载量高等特点,可特异性地与动植物或者微生物裂解液、血清、腹水等样品中含有His标签的蛋白结合,从而用于带有His标签蛋白或蛋白复合物的纯化、免疫沉淀(Imm...
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2025
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研究背景:肝细胞癌(HCC)是全球癌症死亡的主要原因。临床通常采用肝切除术、消融治疗、肝移植、介入灌注疗法及化疗等常规治疗方案。然而,肝癌死亡率仍呈逐年上升趋势。在肝癌研究领域,据报道DCR3 mRNA和蛋白在HepG2和SMCC7721(肝癌)细胞中高表达,而在LO2(正常肝)细胞中几乎检测不到。因此,DCR3有望成为小分子疗法的理想靶点,通过增强药物向肿瘤部位的递送效率,显著提升肿瘤治疗效果。四氧化三铁(Fe3O4)纳米颗粒作为最传统的磁性纳米材料,在生物医学领域尤其是靶向药物/基因递送系统中备受关注,这得益于其卓越的磁学性能、生物相容性、低毒性、可生物降解性及其他优势特性。很多研究表明磁性微机器人在生物医学应用中的潜力日益凸显,为癌症治疗提供了精准靶向、可控药物递送和创新治疗策略。研究内容:该研究提出了一种兼具磁驱运动与化学趋化行为的双响应纳米颗粒,该颗粒能够沿血液和组织中的DCR3蛋白梯度定向迁移,从而有效靶向体内肝脏肿瘤部位(图1)。通过聚乙二醇修饰的30 nm Fe3O4(Fe NPs)(购于南京东纳生物,货号:Mag3200)利用粒子间的磁相互作用,在特殊磁场控制下形成集群实现磁靶向;将铁纳米粒子(Fe NPs)与DCR3抗体偶联得到Fe NPs-DCR3,进一步提升了药物向肿瘤部位递送的精准性。并通过体内体外实验证明Fe NPs-DCR3相比于单独的Fe NPs具有...
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内毒素也称为脂多糖(lipopolysaccharides,LPS),是革兰氏阴性菌外膜的主要成分,所有革兰氏阴性菌的生长、分裂与死亡过程,都会释放内毒素;而内毒素具有“微量致病”的毒性特点,不仅干扰细胞生长、蛋白活性等研发生产过程,也给人体健康造成极大的威胁,极低浓度内毒素即可诱导哺乳动物发生热原反应和休克[1]。因此各国药典都对医药产品的内毒素含量设定了严格限值,内毒素的去除和检测成为生物制品生产工艺中的重要环节,也是保障产品安全性的核心步骤。不同革兰氏阴性菌来源的LPS通常由三个区域组成:O-特异性多糖链、核心多糖和脂质A(如图1所示),其中脂质A是内毒素生物活性和毒性主要来源。在生物药物研发及生产的过程中,内毒素的去除方法的选择需结合内毒素的特性(如稳定性、溶解性、分子量等)和应用场景[2],如液体样品中内毒素去除,会根据内毒素的分子量大小选择超滤法;生产设备、实验器皿等常选择高温、强酸、强碱等手段破坏脂质A的结构等。 图1.内毒素结构示意图 东纳生物围绕“精准捕获”的核心思路,利用脂质A是内毒素最保守的区域及磁珠超顺磁性的特点,以脂质A为靶点,开发出MagBeads®内毒素去除磁珠,可有效清除生物样品中各种革兰氏阴性菌释放出的LPS。MagBeads®内毒素去除磁珠工作流程如图2所示,操作简单省时,仅需配合磁分离工具即可高效去除内毒素;无需昂贵耗材...
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N-羟基磺基琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)活化磁珠表面修饰有亲水性聚合物涂层,以及用于蛋白或核酸偶联的Sulfo-NHS官能团。与传统的羧基、氨基磁珠相比,该磁珠无需活化,其表面的Sulfo-NHS基团可直接与蛋白上的伯胺(-NH2,如赖氨酸侧链或N-末端)高效反应形成酰胺键,降低了操作难度和时间(通常可在2-3小时内完成)。Sulfo-NHS酯的水溶性比传统NHS酯更好,整个标记反应在温和的水溶液体系中进行,避免了使用有机溶剂(如DMSO/DMF),最大程度地保持了蛋白的天然构象和生物活性,减少了因标记过程导致的蛋白变性和失活。同时,由于标记效率和纯化效率高,整个过程非特异性吸附和损失极少,用户可以使用微量的起始蛋白完成标记,尤其适用于来源困难、表达昂贵或非常珍贵的蛋白样品。偶联后的磁珠可用于下游免疫分析或免疫沉淀试验。 产品特点 · 磁珠功能基团:磺基琥珀酰亚胺,与伯胺基团(-NH2)定向结合· 高偶联量:抗体偶联量10 mg/mg· 易操作:无需活化操作,与蛋白/抗体轻松偶联· 兼容性强:可与含伯胺基的蛋白、多肽、核酸、药物等共价偶联,偶联后结构稳定不易脱落· 较低非特异性结合:磁珠表面进行特殊处理,除伯胺基团外不会进行其他杂质吸· 多用途:(1)偶联抗体后可用于IP、CoIP、Chip、蛋白纯化等;(2)可配合磁...
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