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病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒(磁珠法)
产品名称:

病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒(磁珠法)

上市日期: 2018-03-16

产品货号:MBD60904-50

产品规格:50T


产品说明书:


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产品概述

【简  介】

本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统,从样品中分离纯化高质量基因组DNA/RNA,特殊包被的磁珠,在一定条件下对目的基因具有很强的亲和力,而当条件改变时,磁珠释放吸附的DNA/RNA,能够达到快速分离纯化DNA/RNA的目的。整个过程安全、便捷、提取的DNA/RNA纯度高


【订货信息】
 

  

  

  

MBD60904-50

病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒(磁珠法)

50T


适用范围:从血浆/血清/淋巴液中提取病毒的DNA/RNA,适用于核酸自动化提取平台。

 

【产品信息】

试剂盒组成

数量

裂解液S1

24 mL*1

裂解液S2

7.5 mL*1

磁珠

2.5 mL*1

洗脱液

5 mL*1

使用说明书

1

 

【注意事项】

1. 磁珠用前一定要充分混匀。

2. 整个裂解过程操作尽量温和,并在要求时间内完成。

3. 如果组织液浓度较高,则建议磁珠量可适当增加,以获取高浓度DNA。

 

【操作步骤】

1. 裂解

取200μl样本至1.5mlEP管中,加入480μl裂解液S1、150μl裂解液S2,研磨均匀,然后转移至1.5ml EP管中,吹打或点阵混合均匀。然后把EP管置于恒温水箱中65℃温育25~30min。待冷却到室温,加入400ul氯仿,剧烈震荡15s,静置3min,12000rpm离心10min。

2. 结合

尽量取净上清于新的1.5 mL EP管中,加入等体积的异丙醇(用户自行配置)以及振荡混匀的50 μL磁珠,颠倒混匀3 min,静置1 min。将EP管置于磁铁上进行磁分离,吸弃废液(吸净管盖及管底残液)。

3. 洗涤

加入600 μL 70%乙醇溶液(用户自行配置),轻柔混匀1~2 min,然后磁分离,吸净管盖及管底的残液;重复本步骤一次。

4. 洗脱

室温晾干5~10 min至乙醇挥发完全,加入50~100 μL洗脱液,缓慢抽吸混匀,56℃温浴10 min。每隔2~3 min轻摇EP管几下混匀。然后磁分离,小心吸取上清液至新的EP管中,进行下步实验。(判断磁珠晾干的标准:侧面观察磁珠无反光,正面观察磁珠边缘龟裂)

 

【常见问题及参考意见】

1. 得率低

(1)样品裂解不充分,裂解时间不够或没有离心直接进行下一步操作;

可适当延长裂解时间,最长不超过60 min。样品裂解后,请一定要离心后再进行下一步操作;

(2)结合不充分;

结合过程中要使磁珠一直处于悬浮状态,并且充分颠倒混匀;

(3)取样量大于说明书给出量;

取样量请严格按照说明书操作。


2. 条带弥散

(1)样品不新鲜或反复冻融多次:尽量用新鲜样品进行试验,如果样品需要保存,可根据试验,分装保存样品,尽量避免反复冻融;

(2)裂解时间太长:裂解时间不要超过60 min;

(3)提取后模板DNA/RNA放置时间太长:提取后如有需要,请尽量及时进行凝胶电泳试验。短期内可置于4 ℃保存,长期请置于-20 ℃/-70 ℃保存(尽量注意避免反复冻融)。


3. DNA/RNA液有颜色

(1)洗涤过程不充分:如果结合后磁珠呈团状、 丝状或颗粒状,要增加点震力度及次数,充分吹打混匀。

(2)裂解不充分:适当增加裂解液S1和S2用量,也可以延长裂解时间。

(3)样品用量大于说明书给出量而其他试剂用量没有相应调整:严格按照说明书操作,如果需要增大样本量,可以等比例增加裂解液S1、S2以及磁珠用量,其他试剂用量可不改变。


4. DNA/RNA样品不纯,干扰后续实验

(1)DNA/RNA液有乙醇残留:洗涤时,请注意吸净管盖及管底的残液。此外,磁珠应完全干燥,保证无乙醇残留。

(2)磁珠洗涤不充分:加入70%乙醇溶液时,请吸打或点振混匀。如有必要,可增加一次洗涤步骤。

(3)DNA/RNA液中吸入磁珠:如果不小心吸入磁珠,请将上清液返回原管,待磁珠完全吸附至管壁后重新吸取上清。或者将吸取的上清液10000 rpm离心2 min,再取上清。

(4)DNA/RNA液中含有蛋白质等杂质:建议适当减少样品用量。或可重复一次提取过程去除杂质。

(5)DNA/RNA液中含有轻微盐离子等杂质,此为洗脱液(含有抑制核酸降解的成分)正常现象,不影响下游实验。如有特殊需要,可使用等量的经高压灭菌的去离子水作为洗脱液。


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