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唾液基因组DNA提取试剂盒(磁珠法)
产品名称:

唾液基因组DNA提取试剂盒(磁珠法)

上市日期: 2018-03-16

产品货号MBD03A 

产品规格:10/50/100T


产品说明书:

唾液基因组DNA提取试剂盒(磁珠法)MBD03A-唾液基因组DNA提取试剂盒(磁珠法).pdf


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产品概述

 【简  介】

本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统,从样品中分离纯化高质量基因组DNA,特殊包被的磁珠,在一定条件下对目的DNA具有很强的亲和力,而当条件改变时,磁珠释放吸附的DNA,能够达到快速分离纯化DNA的目的。整个过程安全、便捷、提取的DNA纯度高。使用本试剂盒纯化的基因组DNA均在1.7~2.0之间,可以应用到各类下游分子生物学实验。


【订货信息】 

  

  

  

MBD03A 

唾液基因组DNA提取试剂盒(磁珠法)

10/50/100T



适用范围:口腔拭子、咽拭子以及漱口水等多种口腔样本。

 

【产品信息】

唾液基因组DNA提取试剂盒(磁珠法)


【注意事项】

1、 磁珠使用前一定要充分混匀。

2、如果同等取样量下欲得到更多DNA 可以增加洗脱次数(洗脱次数最好不要超过3 次),也可以适当延长裂解时间。

3、结合液异丙醇客户自备。


【操作步骤】

1、裂解

取200μl样本至1.5mlEP管中,加入600μl裂解液S1-2、40μl裂解液S2,研磨均匀,然后转移至1.5ml EP管中,吹打或点阵混合均匀。然后把EP 管置于恒温水箱中65℃温育15~20min。待冷却到室温,加入400ul氯仿,剧烈震荡15s,静置3min,12000rpm离心10min。

2. 结合

尽量取净上清于新的1.5 mL EP管中,加入等体积的异丙醇以及振荡混匀的50 μL磁珠,颠倒混匀3 min,静置   1 min。将EP管置于磁铁上进行磁分离,吸弃废液(吸净管盖及管底残液)。

3. 洗涤

加入600 μL 70%乙醇溶液(用户自行配置),轻柔混匀1-2 min,然后磁分离,吸净管盖及管底的残液;重复本步骤一次。

4. 洗脱

室温晾干5~10 min至乙醇挥发完全,加入50~100 μL洗脱液,缓慢抽吸混匀,56℃温浴10 min。每隔2~3 min轻摇EP管几下混匀。然后磁分离,小心吸取上清液至新的EP管中,进行下步实验。(判断磁珠晾干的标准:侧面观察磁珠无反光,正面观察磁珠边缘龟裂)

 

【常见问题及参考意见】

得率低

(1)样本没有完全裂解完,裂解时间不够或没有离心直接进行下一步操作;

可适当延长裂解时间,最长不超过60min。样品裂解后,请一定要离心后再进行下一步操作;

(2)结合不充分;

结合过程中要使磁珠一直处于悬浮状态,并且充分颠倒混匀;

(3)取样量大于说明书给出量;

取样量请严格按照说明书操作。

条带弥散

(1)样品不新鲜:尽量用新鲜样品进行试验,如果样品需要保存,可根据试验,分装保存样品,尽量避免反复冻融;

(2)裂解时间太长:裂解时间不要超过60min;

(3)提取后模板DNA 放置时间太长:提取后如有需要,请尽量及时进行凝胶电泳试验。短期内可置于4℃保存,长期请置于-20℃保存(尽量注意避免反复冻融)。

DNA液有颜色

(1)洗涤过程不充分:如果结合后磁珠呈团状、丝状或颗粒状,要增加点震力度及次数,充分吹打混匀。

(2)裂解不充分:将组织充分研磨、适当增加裂解液S1-2和S2用量,也可以延长裂解时间。

(3)样品用量大于说明书给出量而其他试剂用量没有相应调整:严格按照说明书操作,如果需要增大样本量,可以等比例增大裂解液S1-2、S2以及磁珠用量,其他试剂用量可不改变。

DNA样品不纯,干扰后续实验

(1)DNA液有乙醇残留:洗涤时,请注意吸净管盖及管底的残液。此外,磁珠应完全干燥,保证无乙醇残留。

(2)磁珠洗涤不充分:加入70% 乙醇时,请吸打或点振混匀。如有必要,可增加一次洗涤步骤。

(3)DNA液中吸入磁珠:如果不小心吸入磁珠,请将上清液返回原管,待磁珠完全吸附至管壁后重新吸取上清。或者将吸取的上清液10000rpm离心2min,再取上清。

(4)DNA液中含有蛋白质等杂质:建议适当减少样品用量。

(5)DNA液中含有轻微盐离子等杂质,此为洗脱液(含有抑制核酸降解的成分)正常现象,不影响下游实验。如有特殊需要,可使用等量的经高压灭菌的去离子水作为洗脱液。为方便实验,可将获得的DNA置于-20℃环境分装保存。

 


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